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Camtag-抗 β-肌动蛋白兔单克隆抗体介绍
发布时间： 2022-11-01 点击次数： 455次北京华新康信现货 大力回馈新老客户，现货打折出售，现有品牌和种类，新老客户可以自由选购：
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Camtag-AT0009
抗 β-肌动蛋白兔单克隆抗体加载控制目录编号: AT0009Actin 是高度保守的蛋白质，参与各种类型的细胞运动，并在所有真核细胞中普遍表达。该抗体在 Jurkat、 A431、 HEK293、 HepG2、 MCF-7、 NIH3T3和 PC12全细胞裂解物中均呈阳性信号。这种抗体在下列 FFPE 组织中的 iHC 呈阳性反应: 人类正常皮肤和 IF 中的 HeLa 细胞系。
大小: 100μL 浓度: 1毫克/毫克可用性: 库存 概述抗 -β-肌动蛋白兔单克隆抗体反应性小鼠，大鼠，人体测试应用 WB: 1/1000-1/10000尚未在其他应用中测试。最佳稀释度/浓度应由最终用户确定。产品图片 人 β-肌动蛋白1-100残基中的免疫原合成肽。克隆性单克隆，克隆号: 9E6同种型兔 IgGForm 液体防腐剂: 0.02% 氮化钠成分: 1% BSA，PBS。PH7.4贮存指引短期(1-2星期)贮存在摄氏4度以下。分量存放于摄氏零下20度或80度。避免重复的冻结/解冻循环。所有泳道: 1:5000泳道的抗 β-肌动蛋白抗体-负载控制(AT0009)1: Jurkat (人类 T 细胞淋巴细胞样细胞系)全细胞裂解物泳道2: A431(人类上皮癌细胞系)全细胞裂解物泳道3: HEK293(人类胚胎肾细胞系)全细胞裂解物泳道4:HepG2(人肝细胞肝癌细胞系)全细胞裂解物巷5: MCF7(人乳腺癌细胞系)全细胞裂解物巷6: NIH 3T3(小鼠胚胎成纤维细胞系)全细胞裂解物/蛋白质每泳道30μg。在1/3000稀释条件下对兔 IgG-H 和 L- 预吸附(HRP)进行山羊次级多克隆。蛋白质印迹: β-肌动蛋白兔单克隆抗体(AT0009)使用1:1000稀释的该抗体分析不同裂解物上的 β-肌动蛋白。1号车道: HEK293,2号车道: Hela，3号车道: PC-12,4号车道: NIH/3T3
细胞骨架由三种类型的胞质纤维组成: 微管，微丝(肌动蛋白丝)和中间丝。球形微管蛋白亚基包括微管构建块，α/β-微管蛋白异二聚体形成所有真核细胞共有的微管蛋白亚基。需要 γ-微管蛋白使微管蛋白亚基的聚合成核，从而形成微管聚合物。许多细胞运动是由微管作用介导的，包括纤毛和鞭毛的跳动，膜囊泡的细胞质运输，减数分裂/有丝分裂期间的染色体排列和神经细胞轴突迁移。这些运动是由于竞争性微管聚合和解聚或通过微管运动蛋白的作用。容量: 100ul容量: 1毫克/毫升可用性: 库存概述/小鼠对 β-微管蛋白的单克隆抗体加载控制反应性人、小鼠、大鼠、兔、猴、牛、仓鼠。经测试的申请: 1/2000-1/10000。预测分子量: 55kDa。尚未在其他应用程序中测试。最佳稀释度/浓度应由最终用户确定。产品图片 这种抗体检测内源性 β 微管蛋白水平。人 β-微管蛋白氨基末端相应的免疫原合成肽。克隆/单克隆，克隆号: 6C4同种型小鼠 IgG1表型液，1mg/mL 小鼠单克隆免疫球蛋白100μg，pH7.3(+/-0.1) ，50% 甘油0.1 mg/mL 牛血清白蛋白(IgG，无蛋白酶)作为稳定剂，0.02% 氮化钠作为防腐剂。贮存指引短期(1-2星期)贮存在摄氏4度以下。配料及贮存在摄氏零下20度，避免冷冻/解冻循环。数据库链接 SwissProt: P07437 HumanSwissProt: P99024 MouseSwissProt: P69897 RatHostMouse 应用程序 WB ImageWestern 印迹显示人脑(小脑)组织，人脑(下丘脑)组织，小鼠脑(小脑)组织和小鼠脑(干)组织的裂解物。在大约55kDa (如所示)检测到 β 微管蛋白的特异性条带。本实验是在还原条件下进行的。蛋白质印迹程序1。在0.5毫升冰冷的细胞裂解缓冲液中裂解大约107个细胞(配方如下)。该缓冲液是一种修饰的 RIPA 缓冲液，适用于回收大多数蛋白质，包括膜受体、细胞骨架相关蛋白和可溶性蛋白。这种细胞裂解缓冲制剂可作为一个单独的产品，需要补充蛋白酶抑制剂立即使用前(猫。# FNN0011，温度计)。其他细胞裂解缓冲液制剂，如 Laemmli 样品缓冲液和 Triton-X 100缓冲液，也与本程序兼容。对于每个特定的应用，可能需要对细胞刺激方案和细胞裂解过程进行额外的优化。2.将裂解物以14,000 x g 离心10分钟，清除细胞碎片。或者，裂解物可以在100,000 x g 下超离心30分钟以获得更大的澄清。3.小心地将澄清的细胞裂解物倒入干净的试管中，并用合适的方法测定蛋白质浓度，如布拉德福德试验。建议使用聚丙烯管储存细胞裂解物。4.用等体积的2xLaemmli 样品缓冲液(125mM Tris，pH6.8,10% 甘油，10% sDS，0.006% 溴酚蓝和130mM 二硫苏糖醇[ dTT ])反应裂解物的等分试样，并在100 °C 下将混合物煮沸90秒。5.将10 ~ 30μg 的细胞裂解物加入适当的单一百分比或梯度微凝胶孔中，用 SDS-PAGE 电泳分离蛋白质。6.在准备西药转移时，切一块比凝胶稍大的 PVDF。膜在甲醇中浸泡1分钟，然后用 DDH2O 冲洗5分钟。或者，可以使用硝化纤维素。7.在转移缓冲液(配方如下)中浸泡薄膜、2片 Whatman 纸和 Western 仪器海绵2分钟。8.将凝胶和薄膜组装到夹层装置中。9.将蛋白质以140mA 的温度在室温下转移6 ° C 0-90分钟。10.转移后，用 Tris 缓冲盐水冲洗膜2分钟。11.用封闭缓冲液(配方如下)在4 °C 下封闭膜过夜，或在室温下封闭膜一小时。12.在补充有1% 无 Ig BSA 和0.1% 吐温 -20的 Tris 缓冲盐水中以1:1000起始稀释度将封闭的印迹与一抗在4 °C 孵育过夜或在室温下孵育2小时。13.用添加0.1% 吐温20的 Tris 缓冲盐水洗涤印迹。14.使用合适的第二抗体，如山羊抗兔 IgG 结合的 HRP (Cat。# AT0097-100ul，Engibody)或山羊抗小鼠 IgG 结合 HRP (Cat。# AT0098-100ul，Engibody)与您的化学发光试剂和仪器一起使用。故障排除指南西部印迹故障排除1。没有信号。高背景3。非特定波段4。波段大小错误5。黑色/灰色污点上的白色条纹6。“抹黑"1。故障排除: 无信号样品准备•未经测试的物种？积极控制。检查校准。‧样本中或凝胶上的抗原不足。转移到膜上•转移不良。‧过度清洗。阻塞•太多阻塞。优化封闭剂、浓度和时间•交叉反应封闭剂/抗体。抗体孵化和检测•抗体不足。‧第二抗体不正确。•检测试剂盒旧基质无效。2.故障排除: 高背景转移到膜. 膜的选择。阻塞•需要阻塞更长时间。•优化封堵剂、浓度。•封闭剂与一级或二级封闭剂之间的交叉反应。‧磷酸化特异性蛋白质: 使用酪蛋白阻断。抗体孵化和检测•一级抗体浓度过高。‧孵化温度过高。3.故障排除: 非特异性条带样品制备•细胞系在其蛋白质表达谱上可以积累差异。•蛋白质有多种修饰形式，改变了流动性。目标蛋白质成片段-被蛋白酶降解或切割。•剪接变体/同种型或可能来自同一家族的蛋白质。‧蛋白质的多聚体(二聚体)(还原和变性)。•乐队可能不是特定的。运行无主控制阻塞•阻塞不足。优化注意力，时间。抗体孵化和检测•一级或二级抗体浓度过高。抗体尚未提纯。
4.故障排除: 不正确的带宽大小样本准备•确保样本减少和变性，除非在数据表中另有说明。•检查异构体。•样本是否为重组片段？这些将运行在不同的大小。5.故障排除: 白色条带/黑色印迹•过多的一级抗体和/或过多的二级抗体。6.故障排除: “涂抹"•过载，蛋白质降解。
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