moltox硝化实验

发布时间： 2023-04-25　　点击次数： 595次

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CJ-F-BVD-10ML	BVDV病毒荧光体	vmrd	10ml
CJ-F-BPV-10ML	BPV病毒荧光抗体	vmrd	10ml
CJ-F-REO-10ML	REO病毒荧光抗体	vmrd	10ml
CJ-F-BAV3-10ML	BAV-3病毒荧光抗体	vmrd	10ml
2004	Alzet Osmotic Pumps	alzet	盒
114-15	jetPRIME	polyplus	1kit
5005	PureCol Type I Collagen Solution, 3 mg/ml (Bovine)	advancedbiomatrix	100ML
1004	渗透泵	alzet	10 个/盒
msr812	0.2 mL PCR Strip 磁力架	permagen	盒
na12878	DNA from LCL	coriell	只
1402-4700	0.2 ml PCR 8-tube FLEX-FREE strip, attached clear flat caps, natural	Usa scientific	120strips
na12877	DNA from LCL	coriell	只
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硝化测定

背景：硝化试验是一种灵敏的方法，用于量化化石燃料衍生的复杂混合物、燃烧产物和各种相关环境样品中多环芳烃的相对含量。该方法依赖于Ames Test菌株TA98对硝基PAC介导的致突变性的端敏感性，以及许多PAC可以相对容易地被化学硝化。由于该试验测量的是化学硝化衍生物的致突变效力，而不是母体PAC本身的致突变能力，因此无法直接测量测试材料的潜在致癌性。

工作原理：该程序的第一步是对测试材料进行化学硝酸处理，通常是在80ºC下与浓硝酸反应30分钟。应该注意的是，对于具有最大生物学意义的PAC，其中包括EPA优先污染物，不需要如此苛刻的反应条件，因为未烷基化和轻度烷基化的化合物在室温下几乎立即被硝化。这里使用的更严格的处理确保了更耐衍生化的化合物发生反应，从而提高了方法的灵敏度。但即使在如此恶劣的反应条件下，也表明只有PAC是衍生的，这是该方法的一个特点，赋予了其近乎绝对的化学选择性。一旦硝化反应完成，将样品冷却至室温并用二氯甲烷萃取。将测量体积的提取物移到新的试管中，剥去二氯甲烷，将所得残留物重组为二甲基亚砜（DMSO）用于Ames测试。用于此目的的Ames试验版本是所谓的“非活化试验"，这是该方法的一个特点，因为所用的试验菌株（TA98）具有将硝基PAC活化为致突变形式所需的内源性硝基还原酶，因此不需要添加外源代谢混合物（S-9）。相对于S-9依赖性测定，如改良艾姆斯试验，该试验的这一方面赋予了其高得多的灵敏度，因为DNA加合物物种在细菌内部产生，不需要通过细胞壁运输到达其最终的DNA靶点。此外，硝基芳烃是一可能在典型测试材料中发现的S-9非依赖性诱变剂，这意味着该方法不仅在化学上，而且在生物上对PAC具有选择性。

终点：硝化试验的终点与改良艾姆斯试验的终点直接相似，即致突变性的剂量反应曲线斜率。在硝化试验中，它被称为硝化致突变性指数（NMI）。

NMI的解释：如上所述，NMI不能直接预测致癌潜力。相反，它被用作比较各种成分相关的复杂混合物的相对PAC含量的一种手段，与有时使用IP 346和其他分析方法的方式大致相同。然而，由于改良Ames试验和硝化试验中测得的致突变性与PAC浓度成正比，因此应该可以在具有密切相似组成特征的炼油厂物流的两个终点之间建立相关曲线。

应用：硝化分析适用于任何含有PAC的样品。它对环境或生物监测样品特别有用，因为样品大小或PAC浓度对于标准方法（如改良Ames试验和方法IP 346）来说太低。

它已成功用于以下应用程序：1。炼油厂物流、金属加工液、再精炼油、燃烧产物的测试。2.对空气、水和土壤进行测试，这既是绘制污染物分布图的一种手段，也是监测受污染场地清理作业效果的一种方式。3.生物监测研究中尿PAC代谢产物的测量。4.PAC从基质（如沥青）中的可浸出性。5.生物样品中PAC相对含量的测定。

物流：见改良艾姆斯测试。

工作成果：我们将与赞助商合作，根据他们的个人需求量身定制研究。

沥青微成型

背景：对于大多数工业应用，沥青必须加热到可使用的温度，或者溶解（乳化）在溶剂中。前一种方法是迄今为止使用广泛的方法，它会产生含有低水平多环芳烃（PAC）的烟雾，其中包括可疑和已知的致癌物。

对工人可能接触此类化合物的担忧促使人们对沥青行业进行了大量流行病学和工业卫生研究。虽然从这些研究中学到了很多东西，但由于存在来自环境空气污染、香烟烟雾以及清洁工具和设备所用溶剂等来源的混杂暴露，很难确定测量到的暴露中有多大比例来自烟雾本身，有多大部分来自其他来源。

规避这一问题的努力集中在两种基本方法上：第一，研究在受控实验室条件下产生的工作场所类似烟雾，第二，通过实施临时工作规则和/或使用适当的防护设备，选择性地排除混杂的现场暴露。

前一种方法，即与PetroLabs的微发光方法相关的方法，其强度是显而易见的：根据定义，实验室产生的烟雾的任何PAC介导的效应都可归因于仅从沥青中提取的化合物。它的弱点是，在过去，为生物研究产生足够的烟雾需要在比工作场所操作中典型的温度更高的温度下加热更长的时间，这两个因素都必然影响所产生烟雾的代表性。

PetroLabs的方法通过使用硝化测定法（见上文链接）来确定在与工作场所使用的时间和温度全一致的条件下产生的烟雾中PAC的相对总含量，从而规避了这一缺点。这种方法是可行的，因为硝化试验只需要亚微克的烟雾量，例如，与典型的改良艾姆斯试验所需的数百毫克烟雾量相比。

由于这种灵敏度水平只能通过测试前对烟雾进行化学硝化来实现，因此Ames测试中测量的致突变性不是由PAC本身介导的，而是由其硝基衍生物介导的。这反过来意味着，当用作独立测试时，微法只能在各种实验参数下为相同沥青产生的烟雾提供相对的PAC含量。

然而，如果需要更多的定性信息，PetroLabs现在提供HPLC和GC-MS分析（见上文链接），可用于对微加工产生的烟雾进行化学表征，并将其与工作场所、沥青储存筒仓顶部空间或实验室中使用更宏观的方法收集的烟雾进行比较。

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