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使用单克隆重组兔抗 c-Fos 抗体 226 008 改进您的 c-Fos 实验
原癌基因 c-fos 属于即刻早期基因 (IEGs)，在大脑中快速而短暂地表达 (Herrera 和 Robertson，1996)。它可以由各种刺激诱导，通常用作神经元激活的标志物（Morgan 等，1987；Gaiddon 等，1996；Chowdhury 等，2000；Gallo 等，2018；Wakhloo 等。 , 2020)。像许多其他 IEG 一样，c-Fos 是一种转录因子。它作为异二聚体与 c-Jun 结合到 AP-1 结合位点（图 1），并增强许多其他参与增殖、分化、凋亡或炎症的基因的表达（Ye 等人，2014 年）。
c-Fos 实验的关键技术参数
动物处理：在计划对动物进行 c-Fos 实验时，您应该了解影响您研究的技术缺陷。例如，您应该考虑 c-Fos 表达是时间依赖性的，易受压力影响，并且可以在几分钟后检测到（Herrera 和 Robertson，1996）。重要的是要考虑到许多因素，如动物处理本身（例如针头注射）或在黑暗阶段暴露在光线下（昼夜节律激活）会影响 c-Fos 表达（Asanuma 和 Ogawa，1994 年；Herrera 和 Robertson，1996 年） ）。因此，必须在适当的对照组中准确地计划和进行实验，以避免假阳性结果。
IHC 方案：您应该关心的另一点是您的免疫组织化学 (IHC) 方案。似乎 c-Fos 阳性细胞的总数取决于阈值。许多参数会影响 c-Fos 阳性细胞的可检测数量：组织储存条件、切片方法（低温恒温器或振动切片机）、染色参数（例如孵育温度）、信号增强试剂（Berghorn 等，1994；Werner 等， 1996 年；Mayer 和 Bendayan，2001 年），最重要的是，一抗选择。
c-Fos 抗体：一抗的特异性、灵敏度和信噪比不同，这些特性会影响您的实验结果。因此，我们的目标是提供高度特异性和一致的 c-Fos 抗体，以支持科学研究和实验可重复性。由于单克隆抗体与多克隆抗体相比具有多项优势，因此我们开发了一种新的单克隆重组兔抗 c-Fos 抗体。
单克隆重组 c-Fos 抗体的优势
抗体具有由两条重链和两条轻链组成的共同结构（图 2）。重链和轻链都包含负责目标识别的物种特异性恒定区和可变序列（Davies 和 Metzger，1983）。
在源自特定杂交瘤细胞系的单克隆抗体制剂中，所有单个抗体分子都是相同的，并共享相同的抗原识别位点。相比之下，多克隆抗体（如兔 c-Fos 抗体 226 003）由靶识别序列不同的抗体分子混合物组成。一旦血清用完，就必须对新动物进行免疫。获得的新血清包含具有新的特异性和亲和性的 c-Fos 抗体的新混合物，导致关于多克隆 c-Fos 抗体的实验性能的批次之间的差异。
使用我们的单克隆重组兔 c-Fos 抗体 226 008，我们*地解决了批次间差异的问题。我们对我们一贯表现良好的大鼠单克隆 c-Fos 抗体 226 017 的 c-Fos 目标识别域进行了测序，并将它们融合到兔 IgG 的恒定抗体区域（图 3）。
这种高度明确的单克隆重组抗体可以在受控条件下作为无限资源在哺乳动物细胞中表达，并且批次之间的差异最小。它在我们测试的标准应用中表现出好的性能，相当于甚至优于我们好的兔多克隆 c-Fos 批次（图 4）。虽然多克隆兔抗 c-Fos 抗体 226 003 对实验条件的变化非常敏感（例如，IHC 实验中的孵育温度对信号强度有影响），但单克隆重组兔抗 c-Fos 抗体 226 008导致在各种实验设置中获得稳健的染色结果，因此是您实验的*。
随着时间的推移，这种单克隆抗体将用于许多不同的应用，收集到的所有信息都将有助于更好地表征这种研究试剂。
与多克隆抗体相比，这些信息会积累并且永远不会丢失，使这种研究试剂成为您手中越来越有价值和可靠的工具。
图 4：标准应用 WB、ICC、IHC 和 IHCP 中 SySy c-Fos 抗体“226 003"、“226 017"和“226 008"的比较
图 4：单克隆重组兔抗 c-Fos 抗体 226 008 在我们所有的标准应用中都表现出优异的性能。在相同实验条件下将重组兔抗c-Fos抗体226 008与单克隆大鼠抗c-Fos抗体226 017和多克隆兔抗c-Fos抗体226 003进行比较。在 IHC 和 IHC-P 实验中，c-Fos 抗体用于小鼠和大鼠海马切片的间接免疫染色（显示小鼠切片；IHC：c-Fos = 红色，DAPI = 蓝色；IHC-P：c-Fos = 棕色，苏木精 = 蓝色）。在 ICC 实验中，c-Fos 抗体用于大鼠海马神经元的间接免疫染色（c-Fos = 红色，MAP 2 188 011/188 002 = 绿色，DAPI = 蓝色）。在蛋白质印迹实验中，在 TPA 刺激的 HeLa 细胞的核提取物中检测到 c-Fos（检测：AP 染色）。
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