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产品时间：2024-05-17
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乙酰赖氨酸工具
概述
翻译后乙酰化发生在赖氨酸残基的ε-氨基上，作为一种可逆且高度动态的PTM，已知其是多种细胞事件的关键调节因子，包括染色质结构、转录、代谢、信号转导和细胞骨架调节。
主要功能
首乙酰赖氨酸研究者的优化试剂盒
分析细胞或组织样品中内源性或转染蛋白的乙酰化
最完整的乙酰化蛋白质图谱
化学计量分析带来更深入的机理见解
查看备受关注的Signal™Seeker工具箱的新增内容（如下）
新格式-信号导引头乙酰赖氨酸检测试剂盒（目录号BK163-S.15测定）
新格式-信号导引头乙酰赖氨酸检测试剂盒（目录号BK163，30个测定）
新-信号导引头乙酰赖氨酸检测试剂盒-AAC03（目录号BK164，30个测定）
新格式-乙酰赖氨酸亲和珠（AAC04
乙酰赖氨酸抗体小鼠单克隆抗体
乙酰赖氨酸小鼠单克隆抗体
抗乙酰赖氨酸抗体是一种泛乙酰赖氨酸酯小鼠单克隆抗体，是Signal Seeker™产品线的一部分。抗乙酰赖氨酸抗体识别通过赖氨酸残基的ε-胺基团上的乙酰化进行翻译后修饰的蛋白质，所述赖氨酸残余基出现在所有蛋白质的30-50%上，特别是组蛋白、p53、微管蛋白和肌球蛋白。使用乙酰化蛋白的专有混合物来产生高度强健的抗体，该抗体已被证明在IP、WB、ChIP和IF应用中识别广泛的乙酰化蛋白。这种抗乙酰赖氨酸抗体与其他市售抗体相比具有许多优点，如下所示。
已验证的应用程序
使用乙酰赖氨酸抗体的蛋白质印迹
细胞骨架的抗乙酰赖氨酸抗体类别#AAC01识别0.005ng化学乙酰化的BSA，并且在灵敏度上与其他市售抗体相当。与其他抗乙酰赖氨酸抗体不同，该抗体与非乙酰化BSA没有显示出交叉反应性。要查看完整的蛋白质印迹比较，请参阅优化方案或产品数据表。
乙酰赖氨酸蛋白质印迹
使用乙酰赖氨酸抗体的免疫沉淀
将AAC01对IP组蛋白的能力与其他市售抗体进行比较。Cytoskeley的抗乙酰赖氨酸抗体为IP应用提供了明显的优势。每个试管足以进行大约20次IP测定。要查看完整的免疫沉淀比较，请参阅优化方案或产品数据表。
乙酰赖氨酸免疫沉淀
使用乙酰赖氨酸抗体的免疫荧光
将未经处理（顶部）或用TSA（5mM，12小时）处理（底部）的人表皮样癌A431细胞按本方法所述染色。乙酰化的细胞质和细胞核蛋白在绿色荧光中可见。注意，与未处理的对照相比，TSA处理的样品中乙酰化微管网络清晰可见。荧光核强度表明核中乙酰化蛋白的丰度很高。要查看完整的免疫荧光方案，请参阅优化方案或产品数据表。
乙酰赖氨酸IF
使用乙酰赖氨酸抗体的ChIP
染色质由未处理或TSA处理（5mM，4小时）的A431细胞制备。简言之，用1%甲醛固定细胞10分钟，并通过使用抗乙酰基抗体（1:100稀释）免疫沉淀酶切染色单体。通过引物对扩增管家基因GAPDH的启动子区，并通过2%琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物。要查看推荐的ChIP协议，请参阅优化协议或产品数据表。
蛋白质乙酰化背景
蛋白质的乙酰化可以作为共翻译或翻译后修饰（PTM）发生（1）。共翻译乙酰化发生在大约85%的哺乳动物蛋白质的N-末端，它是不可逆的，被认为在蛋白质的稳定性、定位和合成中很重要（1）。翻译后乙酰化发生在赖氨酸残基的ε氨基上，作为一种可逆且高度动态的PTM，已知其是多种细胞事件的关键调节因子，包括染色质结构、转录、代谢、信号转导和细胞骨架调节（2-3）。迄今为止，已有4000多种蛋白质被鉴定为PTM乙酰化的靶标，这与细胞前体中的磷酸化相当（3）。抗体AAC01检测乙酰赖氨酸PTMs。
乙酰赖氨酸亲和珠-AAC03
乙酰赖氨酸亲和珠
Cytoskeley提供两种类型的乙酰赖氨酸亲和珠，Cat#AAC02珠和Cat#AAC03珠。这两种试剂都由与G蛋白珠共价连接的小鼠抗乙酰赖氨酸抗体组成，并且都富集了广泛的乙酰化蛋白。AAC02珠粒和AAC03珠粒可以组合以提供更广泛的乙酰化蛋白质富集谱（Cat#AAC04珠粒是AAC02珠与AAC03珠的1:1组合）。
与AAC02珠相比，AAC03珠具有重叠但独的特异性，在检查特定靶蛋白时可能优于AAC02珠，请参阅详细方法和验证应用程序以获取示例。由于乙酰化通常只占总靶蛋白的很小百分比，因此使用优化的试剂对成功至关重要。当检查新的感兴趣蛋白质（POI）的乙酰化状态时，建议分别尝试AAC03珠和AAC02珠，以确定哪种试剂适合y
已验证的应用程序
应用1：检测目标POI中的乙酰化变化
AAC03珠已被证明是乙酰化EGFR和RhoGDI靶标POI免疫沉淀的优良试剂（图1）。在HDAC抑制剂存在的情况下，AAC03珠-IP显示EGFR和RhoGDI的乙酰化分别增强11.3倍和2.5倍。而AAC02 Bead分别表现出较弱的8倍和1.1倍的增长。
图1图例：AAC03珠粒和AAC02珠粒（50µl珠浆）和1:1混合物（各25µl）AAC04珠粒用于脱乙酰酶抑制剂[TSA（1µM）和烟胺（1mM）]处理（+）或未处理（-）的Cos-7细胞的乙酰化蛋白IP 6小时。使用抗EGFR和抗RhoGDI抗体进行蛋白质印迹分析，并使用LiCor-Empiria软件对信号进行定量。还进行IP测定，并对小鼠IgG对照珠的信号进行定量（印迹未显示）。每个IP使用1 mg裂解物。
应用2：总乙酰赖氨酸图谱的免疫沉淀
AAC03珠显示出强大的总乙酰基IP图谱，与AAC02珠具有重叠但特异性图谱。AAC03珠可以单独使用，也可以与AAC02珠组合使用来研究乙酰基组。
图2图例：使用AAC02珠、AAC03珠和AAC04珠（50µl珠浆）对用脱乙酰酶抑制剂[TSA（1µM）和烟胺（1mM）]处理（+）或未处理（-）的Cos-7细胞的乙酰化蛋白进行IP处理6小时。用AAC03-HRP抗体（1:3000）洗脱并通过蛋白质印迹分析富集的乙酰化蛋白的总图谱。使用小鼠IgG珠作为非特异性结合的对照（Cat#CIG02）。每次IP测定使用1 mg Cos-7裂解物
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